异基因造血干细胞移植（HSCT）是治疗恶性血液系统疾病的重要手段之一，近年来兴起的CAR-T疗法能够有效提升HSCT的治疗效果，即CAR-T联合HSCT的桥接方案。随着研究的不断深入，临床发现桥接方案需要进行预处理化疗和应用移植物抗宿主病（GVHD）预防药物，这种处理会导致严重的毒副作用，限制了CAR-T细胞发挥抗肿瘤效果，最终影响患者生存率。因此如何优化治疗方案，进一步降低不良反应成为未来研究的关键。 2024年4月25日浙一黄河院长团队在顶刊The new england journal of medicine杂志（IF：158.5）发表了题为“Sequential CD7 CAR T-Cell Therapy and Allogeneic HSCT without GVHD Prophylaxis”的文章，提出了一种新的CAR-T和HSCT“一体化”治疗策略，突破了上述限制，为CAR-T细胞疗法的发展提供了新的思路和方法。艾沐蒽的ImmuHub®TCR检测技术助力该研究进行HSCT后的治疗效果评估，证实了移植物抗白血病（GvL）效应的持续存在。
该研究的主要战略优势是无需药物骨髓消融和药物预防GVHD，展现了CAR-T细胞的长期细胞毒性和HSCT后的GvL长期效应。研究设计如图1A。 共入组10例复发或难治性CD7阳性血液癌症患者接受了CAR-T细胞治疗和单倍体相合HSCT。1例在HSCT后死于感染，不参与评价，其余9例患者在移植后28天均达到MRD阴性。8例供体植活成功，1例植入失败，自体造血恢复。至末次随访时，有6例患者持续MRD阴性完全缓解（CR），包括自体造血恢复患者，2例死亡（1例死于感染，1例死于CD7阴性白血病复发），1例存活但CD7阴性白血病复发（图1B）。
图1 1年总体生存率（OS）和无病生存率（DFS）分别为68%和54%（图2）。
图2 5例MRD阴性CR的供体植入患者在末次评估时仍可检测到CAR-T细胞，自体造血恢复的患者在CAR-T输注三个月时没有可检测到的CAR-T细胞，两例CD7阴性白血病复发的患者CAR-T细胞无法通过流式检测到，但可以通过实时定量PCR检测到。 外周血中的CD7+T细胞在中位时间8.5天（范围5-13天）被清除，至末次随访时仍未检测到，这表明持续存在的CAR-T细胞能够消除CD7+细胞，并且由于选择压力，存活的T细胞抑制了CD7的表达。 即使在没有使用预防药物的情况下，这些患者依然展现了很低的GVHD发病率，这通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）测定进一步证实。 接下来，作者通过艾沐蒽的TCR测序技术分析了3例患者连续时间点及其相应供体的TCR库动态变化（图3）。HSCT后TCR多样性随时间降低，克隆性增加。在移植后12个月时，患者TOP50克隆的总频率>70%，而在供体中TOP50克隆总频率<25%，这进一步证实了移植后TCR的克隆扩增（图4）。 这些数据表明，持久的CD7 CAR-T细胞可以根除供体来源的CD7+T细胞，并可能有助于GVHD预防。另一方面，恢复的T细胞仍然保持其活化能力，并且其TCR动力学表明移植物抗白血病效应的潜力。文中还引用了艾沐蒽既往的一篇研究，具有类似的结论，具体可见艾沐蒽联合发表 | 通过TCR测序研究造血干细胞移植后的免疫重建与GVT效应。
图3
图4 全外显子组测序显示在任一患者的复发性白血病细胞中没有CD7基因座的突变或遗传改变，单细胞RNA测序证实了复发肿瘤细胞中CD7表达的降低，复发时，正常T细胞上也不表达CD7。复发的白血病细胞表现出涉及造血和细胞因子及趋化因子信号传导的通路失调。因此，作者推断复发不是由于CD7的基因突变，而是由于先前存在的CD7−母细胞的扩增或CD7表达的转录抑制。 作者选取了CD7 CAR-T细胞治疗作为研究对象，发现该治疗方案可以脱离原有CAR-T联合HSCT桥接方案中必须使用清髓和GVHD预防药物的严格要求，仅使用同种异体CD7 CAR-T和HSCT序贯疗法即可实现对复发性或难治性CD7阳性癌症患者有效治疗。 新型方案可以有效避免化疗和GVHD预防药物的毒副作用，从而提高CAR-T疗法的适用范围，同时为不适合常规HSCT的复发性或难治性癌症患者提供了一种可行方法，且为其他难治性癌症的治疗提供了新思路，有望在未来得到更广泛的应用。 由艾沐蒽提供的TCR测序在评估治疗疗效中发挥了重要作用，证实了该方案具有长期的GvL效应。 文献来源：Hu Y, Zhang M, Yang T, Mo Z, Wei G, Jing R, Zhao H, Chen R, Zu C, Gu T, Xiao P, Hong R, Feng J, Fu S, Kong D, Xu H, Cui J, Huang S, Liang B, Yuan X, Cui Q, Guo H, Yu Y, Feng Y, Jin C, Ren J, Chang AH, Wang D, Huang H. Sequential CD7 CAR T-Cell Therapy and Allogeneic HSCT without GVHD Prophylaxis. N Engl J Med. 2024 Apr 25;390(16):1467-1480.doi: 10.1056/NEJMoa2313812. 美国FDA发布的针对开发CAR-T细胞治疗的机构的指南草案和我国首部《CAR-T细胞治疗恶性血液肿瘤及免疫靶向治疗相关感染管理指南》均提出对接受CAR-T细胞治疗的患者进行长期监测和随访的建议。艾沐蒽结合自身产品，包括Seq-MRD®，Immun-Traq®，和ImmuHub®的技术优势，整合了一套专为CAR-T的研发和监控的伴随解决方案。 在CAR-T研发中，本解决方案可以用来评估CAR-T疗法的效果。它可以帮助研究人员评估CAR-T对免疫系统的影响，并且在治疗后的随访过程中评估免疫系统的重建情况，并评估CAR-T细胞的持久性。通过MRD水平监测可以帮助研究人员了解疗法的效果，更好地评估疗效，并有效地监控治疗后癌细胞残留的情况。
Seq-MRD®部分参考文献： （1）Min’er Gu, et al. The effectiveness of blinatumomab in clearing measurable residual disease in pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia patients detected by next-generation sequencing.Cancer Medicine (2023) （2）H.Chen. et al. Minimal residual disease detection by next-generation sequencing of different immunoglobulin gene rearrangements in pediatric B-ALL. Nature Communications (2023) （3）Huang, Y. et al. Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy. BMT (2022). Immun-Traq®部分参考文献： （1）Yongxian Hu. et.al. Sequential CD7 CAR T-Cell Therapy and Allogeneic HSCT without GVHD Prophylaxis. The New England Journal of Medicine(2024). （2）Wang, X. et al. Quantitative characterization of T-cell repertoire alteration in Chinese patients with B-cell acute lymphocyte leukemia after CAR-T therapy. Bone Marrow Transplantation (2019). ImmuHub®技术平台参考文献：ImmuHub®技术平台发表文献
杭州艾沐蒽生物科技有限公司成立于2016年，是国际前沿的专注于免疫驱动医学技术的国家高新技术企业。创始人团队来自美国芝加哥大学，在2010年开始使用免疫组基因高通量测序技术开展各种疾病相关研究，于2016年通过自主研发，全国首家推出NGS-MRD血液肿瘤微小残留病（MRD）检测Seq-MRD®，并授权泛生子使用。同时，公司拥有Immun-Traq®肿瘤治疗伴随诊断、Immun-Cheq® |T细胞免疫测评以及ImmuHub®免疫组测序科研服务产品，并布局有基于AI机器学习算法的T-classifier®肿瘤早筛、单细胞测序、TCR-T和抗体发现等平台管线。目前为止发表了数十篇论文，其中包括：The New England Journal of Medicine(IF:158.5), Nature(IF:65), Signal Transduction and Targeted Therapy(IF:40), Cellular and Molecular Immunology(IF:24), Nature Communications (IF:17)等多篇高分杂志。公司构建几十项发明专利和软件著作权为核心的自主知识产权体系，为医院临床、生命科学研究、新药开发等提供解决方案和产品。艾沐蒽专注于通过解码适应性免疫系统来改变疾病的诊断和治疗，并致力于推进免疫驱动医学领域发展。