近期发表于blood advances（IF：7.642）上的一个研究通过免疫组二代测序发现相当一部分经典霍奇金淋巴瘤（cHL）复发是与初诊的原发肿瘤无关的第二次原发性淋巴瘤，并通过基因突变分析证实了这一发现，且在对部分样本进行回顾性克隆性检测和突变分析后发现一些T细胞淋巴瘤（TCL）病例被误诊断为cHL。这些研究发现可能对临床治疗策略具有重要指导意义。
下面让我们来详细了解一下吧！
虽然cHL患者治愈率高，5年总生存率超过90%，但是高达25%的cHL患者表现为难治性或复发的疾病。已有研究证实免疫球蛋白（IG）基因重排可作为确定原发性cHL与复发性cHL之间克隆关系的诊断标志物。除了检测Ig克隆性外，在cHL中还观察到克隆性T细胞受体（TCR）基因重排。而在TCL中TCR重排更常见，其非典型B细胞类似于cHL，二者容易混淆，通过基因突变分析有助于补充临床病理学评估。
作者假设一些患者实际上可能出现新的与原始肿瘤无关的原发性 cHL，因而设计了该研究。分析了 60 名cHL患者的配对初诊和复发组织样本，通过进行基于NGS的Ig和TCR克隆性评估和靶向突变分析来确定cHL初诊和复发之间的克隆关系。
1、样本采集：采集60例cHL患者初诊和复发时的组织样本，共130份，包括99份FFPE和31份新鲜冷冻组织。
2、IG/TCR NGS克隆性检测：参照EuroClonality-NGS工作组制定的建议，检测IGH、IGK或TRB、TRG基因重排。
3、基因突变分析
有53名患者的120个样本的测序结果可用，其中69个检测到显著性克隆IG基因重排，而51个样本显示多克隆模式。配对初诊和复发样本的Ig克隆型比较显示，共有24例患者有相同的显著性克隆型，证实是克隆相关的复发cHL。
除24例克隆相关的复发性cHL外，53例患者中有5例在配对样本中表现出不同的显著性克隆IG基因重排（称为distinct重排）。在另外5例患者中，在初诊或复发样本中检测到的显著性克隆型在配对样本中无法检测到（称为discordant重排）。这10个病例被归类为克隆无关的病例，表明复发时存在不同的恶性B细胞克隆和克隆不相关的cHL（图1）。
在本研究队列中，通过基于NGS的IG基因重排检测，53例患者中有34例（64%）可以建立克隆关系；这34例中有24例（71%）复发，有10例（29%）表现为克隆不相关的新生cHL。在其余19例患者中，在初诊和/或复发的组织标本中未检测到克隆性IG基因重排，导致结果不确定（图2）。
图1
图2
为了证实上述10例患者疑似第二次原发性cHL这一结果，使用TSO500测定（平均中位外显子覆盖率为600×）对配对的初诊和复发样本（n=10）进行靶向突变分析。在初诊和复发时有显著性克隆重排的5例患者中，有4例在两个样本中都发现了相互排斥的基因突变，但有1例有重叠的TET2突变。同样，5例不一致重排的患者中有4例在初诊和复发时存在互斥突变。总之，这些靶向突变分析证实了本研究队列中与克隆无关的cHL的鉴定和第二次原发性cHL的发生（图3）。结合病例临床信息，作者认为第二次新发淋巴瘤的发生可能与免疫失调障碍或淋巴瘤易感性有关。
图3
在43%的cHL样本中，未检测到显著克隆性IG基因重排，进而对57例cHL患者的配对初诊和复发样本进行了TCR-NGS克隆性评估。125个样本中有14个（11%）显示出显著克隆性TRB/TRG基因重排，而其余样本显示出多克隆模式。在14个样本中，有5个样本同时存在克隆性IG和TR基因重排（图4）。
为了评估TCR克隆性的检测是否与cHL复发相关，我们对未复发的cHL患者的对照队列进行了TR-NGS检测（n = 48）。在这里，48个样本中有3个（6%）显示了克隆性TCR基因重排，这表明TCR的克隆性本身并不是有复发倾向的cHL所独有的。
为了确定具有克隆TCR基因重排的cHL样本是否代替了模仿cHL的TCL，我们对TCL相关基因进行了突变分析，来自5例从HL患者的6个样本均显示TCL相关基因突变。这些分子发现表明TCL模仿cHL。通过病理学审查重新评估候选组织样本，结合分子学发现和病理学回顾，发现这5例患者属于TCL（图5）。
TCL越来越被认为是cHL背景下的诊断陷阱。因此，作者认为在常规诊断中应考虑进行TCR克隆性评估和（或）靶向TCL相关基因突变分析，以避免在形态学或临床怀疑以及疾病复发的情况下误诊。
图4
图5
研究证明相当一部分复发的cHL其实是原发肿瘤无关的新发淋巴瘤，通过克隆性评估和突变分析有助于避免TCL被误诊为cHL。这些发现具有重要的临床意义，因为这些患者应该接受不同的治疗策略。对于2年后复发的cHL患者，常规诊断应考虑基于NGS的克隆性评估结合靶向突变分析。
参考文献
van Bladel DAG, Stevens WBC, Kroeze LI, et al. A significant proportion of classic Hodgkin lymphoma recurrences represents clonally unrelated second primary lymphoma. Blood Adv. 2023 Oct 10;7(19):5911-5924.
技术原理
每种B/T淋巴细胞表面均存在一种特异性B细胞受体（B cell receptor,BCR/Ig)/T细胞受体 (T cell receptor,TCR)，由于BCR/TCR因中V、D、J基因片段重组与碱基的随机插入、删减，导致BCR/TCR具有高度多样性的特点，从而BCR/TCR可作为每个B/T淋巴细胞唯一的分子标签。
淋系血液癌症患者因B/T淋巴细胞发生癌变，癌细胞继而自我复制形成克隆性增殖，因此，通过检测B/T淋巴细胞表面受体BCR/TCR可以鉴定癌细胞并追踪检测癌细胞的动态变化。
检测类型
1.癌细胞克隆性检测
通过患者初诊或癌细胞高负荷时的骨髓样本，找到癌细胞特有的DNA“标签”序列。
2.MRD追踪检测
利用筛查出的DNA“标签”序列，在治疗期间或治疗后评估MRD水平，监测癌细胞含量，同时检测识别新出现的癌细胞序列。
适用人群
1. B系血液系统癌症
急性/慢性B淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、B型淋巴瘤。
2. T系血液系统癌症
急性/慢性T淋巴细胞白血病、T型淋巴瘤。
意义
Seq-MRD®能提供高精度、高灵敏度的MRD检测解决方案，可帮助医生更准确地评估癌症患者的治疗反应和预后。这些技术在现代肿瘤治疗中扮演着越来越重要的角色，因为它们能够帮助医生识别那些患病复发风险高的患者，并为他们提供更个性化、更有针对性的治疗方案。
获得欧盟CE资质认证
Seq-MRD®获得欧盟CE资质（注册号：DE/CA20/01-IVD-Luxuslebenswelt-190/22），获批的是人淋巴B细胞微小残留病基因检测试剂盒（可逆末端终止测序法）。
获得三项发明专利
艾沐蒽推出的Seq-MRD®血液癌症MRD检测是最早批实现商业化的产品，自2016年研发专利技术至今，艾沐蒽Seq-MRD®已经获得3项国家发明专利：
[1]“一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒”（专 利 号: 2016 11204857.0，授权公告号:CN 106957906 B）
[2]“一种检测微小残留病MRD的试剂盒”（专 利 号: 2018 1 1550133.0，授权公告号: CN 109652518 B）
[3]“一种检测微小残留病MRD的方法”（专 利 号: 2018 1 1549203.0，授权公告号: CN 109680062 B）
发表相关文献
Seq-MRD®发表相关文献
Huang Y, Zhao H, Shao M, Zhou L, Li X, Wei G, Wu W, Cui J, Chang AH, Sun T, Hu Y, Huang H. Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy. Bone Marrow Transplant. 2022 Jun 1. doi: 10.1038/s41409-022-01699-2. Epub ahead of print. PMID: 35650329.（点击链接可查看文章内容）
获得国际市场认可
2023年DelveInsight公司发布的MRD国际市场研究报告中，艾沐蒽/Seq-MRD®是中国唯一一家公司/产品进入国际调研市场报告。DelveInsight是一家领先的医疗保健市场研究和商业咨询公司，以其现成的联合市场研究报告以及为医疗保健行业的公司提供的定制解决方案而闻名。
杭州艾沐蒽生物科技有限公司成立于2016年，是国际前沿的专注于免疫驱动医学技术的国家高新技术企业。创始人团队来自美国芝加哥大学，在2010年开始使用免疫组基因高通量测序技术开展各种疾病相关研究，于2016年通过自主研发，全国首家推出NGS-MRD血液肿瘤微小残留病（MRD）检测Seq-MRD®，并授权泛生子（纳斯达克代码：GTH）使用。同时，公司拥有Immun-Traq®肿瘤治疗伴随诊断、Immun-Cheq® |T细胞免疫测评以及ImmuHub®免疫组测序科研服务产品，并布局有基于AI机器学习算法的T-classifier®肿瘤早筛、单细胞测序、TCR-T和抗体发现等平台管线。公司构建几十项发明专利和软件著作权为核心的自主知识产权体系，为医院临床、生命科学研究、新药开发等提供解决方案和产品。艾沐蒽专注于通过解码适应性免疫系统来改变疾病的诊断和治疗，并致力于推进免疫驱动医学领域发展。
