近日，艾沐蒽联合浙江大学附属第一医院黄河院长团队在Nature子刊BMT上发表了题为“Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy”的研究论文。此研究是通过高通量测序检测恶性血液病患者CAR-T细胞治疗后的微小残留病灶注册临床试验(ChiCTR1800018468)，并进行了为期5年跟踪的预后研究。
使用艾沐蒽Seq-MRD®检测方法对CAR-T细胞治疗后患者体内微小残留病（MRD）水平进行监测。相比流式细胞仪方法，Seq-MRD®检测结果能提前预测患者复发,可根据Seq-MRD®结果进行早期干预。
微小残留病（MRD）与血液系统恶性肿瘤的风险分层密切相关。在治疗期间和缓解后的时间点监测患者的 MRD 水平对于预防复发至关重要。
嵌合抗原受体 T (CAR-T) 细胞疗法使转基因免疫细胞重新定向以对抗血液系统恶性肿瘤。目前，CAR-T治疗已显示出良好的疗效，然而CAR-T细胞治疗后仍然存在高复发率，传统技术的MRD监测无法准确量化疾病负担，也无法进行高灵敏度的深度监测。在流式细胞术 (FC) 结果显示 MRD < 0.01% 而肿瘤克隆仍然存在的这个时间点，进一步的治疗选择仍然存在争议。
我们测量了 63 个样本的 MRD，以0.01% cut-off，在 46/63 (73%) 的样本中发现Seq-MRD® 结果与FC结果阴阳性是一致的。在 17/63 样本 (27%) 中发现了 Seq-MRD® 能检测出更多的阳性（Table S1）。
在确定具有显著性可追踪序列的 20 名患者中，17名在 +30 天仍然可检测到克隆序列被包括在Seq-MRD®随后的分析队列中，患者的基线特征见Figure a。
Seq-MRD® 检测到 17 名患者中的 9名 (52.9%)，其 MRD 水平 > 0.01%，这组 (n=9) 患者的 LFS 和 OS 均低于Seq-MRD® 检测MRD ＜ 0.01% 的患者。而所有病人的 FC MRD结果均为阴性。说明Seq-MRD®相比FC检测更能准确预测患者的预后（Figure b&c）。
以CAR-T治疗后第 30 天的Seq-MRD®检测结果把10E-6作为cut-off，患者可分为高危组（HR）和低危组（LR）。LR患者的 LFS 和 OS均好于HR患者，但无显著性差异，这是由于部分患者后续进行了HSCT干预（Figure d&e）。
我们对未进行HSCT的患者比较发现LR组相比HR组具有明显较长的的LFS，这说明Seq-MRD®能在HSCT后早期进行预后预测（Figure f&g）。
这里举例了患者1和9在CAR-T细胞治疗早期有不同程度的肿瘤负荷反弹。患者1自治疗后的第一个随访时间点(+33 day)，Seq-MRD®水平持续升高，但前4个时间点，FC-MRD法均未检测到，但患者1治疗95天后临床复发(Figure h)。患者9在第一次随访时间点(+17 day)，MRD下降，但在+30天，Seq-MRD®结果反弹并继续上升，而FC-MRD结果仍然未检测到，随后在三个月内临床复发(Figure i)。在这两种情况下，提示可以根据NGS-MRD结果进行早期干预。
Seq-MRD®具有高灵敏度和特异性的特点，基于此种技术手段检测CAR-T治疗后的MRD水平是一种有效判断预后的方法，尤其是对Seq-MRD® 结果为阳性的HR患者及时进行HSCT会明显改善预后。
参考文献：Huang, Y., Zhao, H., Shao, M. et al. Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy. BMT (2022).