利用T细胞受体（TCR）测序技术，了解肺癌的癌细胞相关抗原和特异性TCR成为热点，结合不同的研究实验方法和数据分析结合，可以帮助我们更好地了解 T细胞免疫应答的机制，以及发展新的肿瘤免疫治疗方法。

4 位非小细胞肺癌病人的肿瘤组织样本和外周血样本。

肿瘤抗原以其并不在正常组织中表达的特性，而作为最为安全的免疫靶标之一，但是，T细胞如何发现和识别这些肿瘤抗原仍旧是个大问题。肿瘤抗原的发现通常是基于主要组织相容性复合物的算法来实现的，但这一方法并没有考虑到T细胞是否可以特异识别抗原这一问题。事实上，2019年一项大规模研究发现，仅仅只有1.6%的抗原可以被T细胞所识别。因此，学界亟需建立可以快速发现T细胞可识别的抗原的方法。

a) 肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的培养

b)组织全外测序和RNA测序，外周血RNA测序

c)未成熟DC的制备

d) I 类 MHC 限制性表位的呈现、 II 类 MHC 限制性表位的呈现

e) TIL和DC培养，Elispot

f) 对共培养 TIL 的 FACS 分析

g) I 类 MHC 限制性抗原的鉴定、 II 类 MHC 限制性抗原的鉴定

h) 从 FACS-sorted TIL 进行质粒克隆 TCR

i) 对转导的TCR 功能性检测

j) CITE-seq 单细胞测序分析

k) bulk CDR3B 深度测序

作者通过对 4 位非小细胞肺癌病人的肿瘤浸润淋巴细胞进行单细胞层面的转录组和 TCR测序分析，确定了一组基于 CD39 和 CXCL13，可以快速识别肿瘤抗原的 T 细胞的分子标签。

178 名可手术切除肿瘤的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的正常肺组织以及肿瘤部位。