检测物种多样化是艾沐蒽免疫组测序科研服务的一个重要优势，先前已助力发表国际首篇蝙蝠TCR库和BCR库的研究成果。近期由艾沐蒽助力的华南农业大学研究团队的关于鸡的TCR和BCR库研究成果“Characterization of TCRβ and IGH Repertoires in the Spleen of Two Chicken Lines with Differential ALV-J Susceptibility Under Normal and Infection Conditions”在animals杂志发表。该研究深入探讨了两个品种的鸡（E系和M系）对禽白血病病毒J亚群（ALV-J）的易感性差异，并从TCR、BCR的角度揭示了其背后的免疫机制，为培育更健康的鸡群提供了新的思路。
研究方法
将E系和M系鸡随机分为对照组和感染组。感染组鸡给予腹腔注射ALV-J病毒，对照组接受生理盐水注射。在感染后的第7天、14天、21天和28天，研究人员分别收集了所有组的血液样本和泄殖腔拭子进行病毒扩散、抗体反应等动态监测，并在21天时采集了部分鸡的脾脏组织用于免疫组TCRβ和BCR IGH库测序分析。
研究结果
01ALV-J感染动态监测
研究人员监测了E系和M系鸡的ALV-J传播扩散、病毒血症和抗体反应动态。结果显示，E系鸡在感染后的各个时间点均表现出较高的P27抗原S/P值（表示病毒排毒阳性），而M系鸡仅在第14天有3只鸡出现排毒现象。在病毒血症方面，E系鸡的阳性率在前三个时间点均高于M系鸡，且在第14天差异显著。此外，E系鸡在感染后28天才开始产生可检测的ALV-J抗体，而M系鸡在第14天就已有一只鸡产生抗体，且在第21天时两种鸡的抗体S/P值差异显著。这些结果表明，E系鸡对ALV-J的易感性更高，且抗体反应速度更慢。（图1）
图1
02TCRβ库分析
三个多样性指标的评估显示M系鸡的感染组和对照组TCRβ库多样性无明显差异；而E系鸡中，感染组的TCRβ克隆多样性显著高于对照组。但E系感染组在TCRβ多样性方面并未超过M系感染组。与E系相比，M系对照组表现出更高的克隆多样性。这表明，无论ALV-J暴露如何，M系维持较高程度的TCRβ库多样性，而E系在感染后克隆丰富度和高频克隆多样性显著增加，但未及M系。（图2）
图2
气泡图显示，与对照组相比，感染组的克隆型丰度更高。在M系中，感染组TOP20克隆所占比例显著高于对照组。E和M系之间的TRB公共克隆有限，但E系感染组公共克隆的比例显著高于其他三组（p<0.01），私有克隆的比例明显低于另三组。这表明E系鸡可能对ALV-J产生了更广泛的免疫反应，而M系鸡则可能产生了更具针对性的免疫反应。（图3）
图3
然后分析了CDR3长度和VJ基因使用情况。E系和M系鸡的TCRβ CDR3长度分布相似且不受ALV-J感染的影响（图4A）。E系和M系对照组的VJ基因使用也相似，但感染ALV-J后，E系和M系鸡表现出不同的TRBJ基因使用模式。E系鸡感染后TRBJ4的使用量减少，而TRBJ5的使用量增加。M系鸡无明显变化。VJ配对在所有组中都是一致的。（图4）
图4
03BCR IGH库分析
M系鸡感染组的克隆丰富度显著高于对照组（图5A）。在感染组中，m系的克隆多样性显著高于E系，而对照组的E和M系之间没有显著差异。（图5）
图5
气泡图显示受感染的M系鸡克隆型更丰富。ALV-J感染后，两品种鸡的克隆扩增均强于各自的对照组。两个品种鸡的IGH公共克隆有限，占比不到20%。在公共克隆中，E系感染组的比例显著高于对照组。（图6）
图6
E系和m系的IGH CDR3序列的长度分布一致，同样，在E系中，感染组和未感染组之间的CDR3长度分布也没有显著差异，但M系中感染组的IGH CDR3长度在特定区域与对照组有显著差异（图7C）。然后比较了基因使用频率差异。E系对照组和M系对照组、E系对照组和感染组、M系对照组和感染组之间均有一些V基因的使用频率有显著差异。CDR3长度和V基因使用的变化可能会影响针对ALV-J的抗原识别效率。（图7）
图7
类别转换重组（CSR）和体细胞超突变（SHM）是B细胞用于提高适应性免疫应答有效性的两个关键机制。M系中感染组的CSR频率明显高于对照组。SHM的突变频率显示，感染组E和M系中IGHY基因的突变频率增加，而IGHM和IGHA基因的突变频率降低，但均未达到统计学意义。（图8）
图8
研究结论
本研究表明对ALV-J具有不同易感性的鸡品系的TCR和BCR库有所不同。更易受感染的E系鸡免疫受体多样性更低，这种差异可能是对病毒不同易感性的基础。在克隆扩增和CDR3长度、基因使用频率方面也表现出不同的偏好，这可能会影响针对ALV-J 的抗原识别效率。本研究为鸡适应性免疫反应的潜在机制提供了更深入的见解。
参考文献
Wang, M.; Zhang, Q.; Ju, R.; Xia, J.; Xu, C.; Chen, W.; Zhang, X. Characterization of TCRβ and IGH Repertoires in the Spleen of Two Chicken Lines with Differential ALV-J Susceptibility Under Normal and Infection Conditions. Animals 2025, 15, 334. https://doi.org/10.3390/ani15030334
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