造血干细胞移植（HSCT）是治疗多种血液系统疾病尤其是血液肿瘤的有效方法，移植后免疫重建是影响移植治疗效果的重要因素之一，因此免疫重建的研究对于提高患者生存质量及移植疗效意义重大。很多临床工作者对该研究方向感兴趣，因此小编整理分享一篇关于探索HSCT后免疫重建机制的高分文献，以供参考~
标题：NK细胞和T细胞库在同种异体HSCT后早期建立，并受 CMV再激活的影响
发表期刊：Blood Advances
发表时间：2024年11月12日
作者采集54名HSCT受者移植后3个月（t3）、6个月（t6）、9个月（t9）、12个月（t12）外周血样本以及移植前配对供者（t0）的外周血样本，进行bulk TCRβ测序，并进行光谱流式细胞术免疫表型分析和KIR基因分型。该研究旨在在人类同种异体HSCT病例模型中剖析NK细胞库和TCR库恢复时间及机制，并进一步追溯与临床事件的关联。
研究结果
01受者TCR库多样性在移植后受到长期限制
受者的TCR库在前3个月克隆性显著增加（即多样性减少），并在随后的时间点保持稳定（P = 1.157e-08 在t0和t3之间; P = 0.076 在t3和t12之间。图1A）。根据频率分层的不同克隆大小类别在移植后会发生变化，尽管前3个月的TCR库几乎完全由扩增的克隆主导，但非扩增克隆（1-2template）在6个月时进行性显著增加并持续到12个月（图1B）。
在个体内水平上计算了移植前后任意2个时间点之间的TCR重叠。供体-受体重叠指数较低，直到移植后1年在整个随访时间内没有增加，表明没有进一步的主要供体来源的克隆扩增（图1C）。移植后3至12个月之间的重叠较低，从6个月开始显著增加，最高重叠率在9 到12个月之间，表明主要克隆大小层次结构是在移植后早期建立的，而TCR 组成周转和定性重建随着时间的推移而稳定（图 1C）。
图1
02CMV再激活驱动强大的TCR免疫反应
根据受体的CMV血清状态将队列分为3个不同的组：CMV血清阴性（D–/R–和D+/R–，n=20）、CMV血清阳性但没有被记录为再激活（D–/R+和D+/R+，n=21）、CMV再激活（D–/R+和 D+/R+，n = 13）。只有CMV阳性的受者在移植后再激活并长达9个月时被记录为CMV再激活。
与CMV再激活组相比，CMV血清阴性和血清阳性受者TCR库多样性变化更平稳（图2A）。在12个月时CMV再激活的受者中，TCR 库克隆性的这种转变以>1%的大规模克隆扩增为主（图2B）。
比较3个月和12个月之间的重叠程度时，CMV再激活组最低，可能反映了TCR库的快速周转，克隆组成和竞争性T细胞克隆的扩增发生了重大变化（图2C）。与另两组相比，CMV再激活组在3到12个月之间重度扩增（>1%）公共克隆的累积频率显著增加（图 2D）。（私有克隆指仅在1个D/R对中观察到，公共克隆指在≥2个D/R对或存在于抗原-TCR公共数据库中的匹配克隆型。）
为了评估免疫反应特异性，作者对照公共数据库中的CMV特异性TCR克隆分析了该数据集。与CMV血清阴性或血清阳性受体相比，没有观察到CMV再激活后CMV特异性克隆的累积频率有富集（图2E）。然而，在免疫转移的假设下，作者观察到与D–/R+ CMV再激活受体（n=9）相比，D+/R+ CMV再激活受体（n=4）中供受体共享的CMV特异性TCR克隆的累积频率显著更高（图 2F）。并且作者发现CMV特异性TCR克隆的频率对 D+/R+再激活受体的克隆性有显著贡献（P=6.89e-07，线性回归），而对D-/R+ CMV再激活受体的克隆性的影响不显著（P = 0.443，线性回归）。
图2
03移植后第一年的动态免疫细胞再生
作者基于35色抗体面板在表型水平上系统评估了NK细胞和T细胞区室。CD4+和CD8+ T细胞在移植后早期显著减少，并缓慢恢复长达12个月（图3A）。循环B细胞的频率从3个月到12个月逐渐增加，但没有达到统计学意义（图 3A）。
CD56bright NK细胞在移植后瞬时扩增，数量显著超过供体，并且从3个月开始急剧减少，逐渐转化为NK细胞成熟，反映在CD56dimCD16+ NK细胞显著增加（图 3B）。CD56dim CD16+CD57+ NK 细胞显著富集，而CD56dim CD16+NKG2A+ NK细胞变化趋势与之相反（图3C）。这种平衡在9个月时稳定下来，两个亚群都没有进一步的显著变化（图3C）。
图3
04CMV再激活诱导NK细胞亚群加速成熟
既往研究证明了CMV的存在是NK细胞免疫状态的决定性调节因子，因此作者计算Aitchison 距离测量细胞组成的差异。CMV再激活受者的3至12个月之间的个体内距离显著更高，反映了该组患者NK 细胞和T细胞免疫状态组成的重大变化（图4A）。这一观察结果首先是由共表达NKG2C和CD57的适应性NK细胞的显著增加驱动的，这与CMV的存在有关（图4B）。
另外，在CMV再激活的受者中，检查点抑制标志物PD-1的CD56dim表达率较高（图 4C）。与KIR2DL1+和KIR3DL1+CD56dimNKG2C+ NK细胞相比，KIR2DL2L3S2+ CD56dimNKG2C+ NK细胞的频率在CMV再激活的受者中显著升高，并显示颗粒酶B含量随着时间的推移逐渐增加（图4D）。相比之下，CMV血清阴性受者的NK细胞以未成熟的CD56bright NK细胞和表达NKG2A+的CD56dim和CD56bright NK细胞为主（图4C）。
图4
研究结论
该研究表明allo-HSCT后的T细胞和NK细胞库重建主要在前3个月内建立，库多样性显著收缩，至少在1年内随着时间推移具有稳定性。CMV可能是循环特异性T和NK细胞外周稳态增殖的重要驱动因素，且具有持久的影响。
参考文献
Schäfer A, et,al. NK- and T-cell repertoire is established early after allogeneic HSCT and is imprinted by CMV reactivation. Blood Adv. 2024 Nov 12;8(21):5612-5624. doi: 10.1182/bloodadvances.2024013117.
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